粉尘螨变应原第7组分全长基因序列测定与分析
Sequencing and Analysis of Full-length Gene Encoding the Group 7 Allergen from Dermatophagoides farinae
目的:获得粉尘螨变应原第7组分编码基因并了解其分子特征.方法:根据GenBank已公布的Der f7核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体进行序列测定和生物信息学分析.结果:获得Der f7全长基因约642 bp,与参考序列(GenBank AY 283292)同源性达99.7%%,仅在249位"A→G"和439位"C→T"发生点突变,含1个完整的开放读码框.推测编码蛋白由213个氨基酸组成,信号肽序列位于1-17aa,亲水性指数为0.031,跨膜区域位于171-190aa,二级结构由-螺旋(57.28%)、延伸主链(6.57%)和无规卷曲(36.15%)组成;亚细胞定位于细胞质,含有N-糖基化位点1个(151-154aa),蛋白激酶C磷酸化位点1个(193-195aa),酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点2个(155-158aa and 173-176aa),N端酰基化位点1个(97-102aa).粉尘螨和屋尘螨变应原第7组分氨基酸序列相似度为86%,二者在螨类第7组分氨基酸序列构建出的分子进化树中聚成一簇.结论:获得了Der f7全长基因,为进一步获得其基因工程制品用于临床和实验研究奠定了基础.
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