换一批摘要采用SYBR Green I real-time PCR方法检测7株转基因小麦中外源半夏凝集素基因的拷贝数.以小麦蜡质基因(wx012)作为内参基因,以未转基因小麦基因组DNA为内参基因标准品进行5倍梯度稀释得到内参基因C_T值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-0.2667x+6.98;以含半夏凝集素基因(pta)的质粒DNA为目的基的因标准品同样进行5倍梯度稀释,建立目的基因C_T值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-0.2118x+4.53.通过SYBR Gteen I real-time PCR 分别获得每一样本中目的基因和内参基因的C_T值,将C_T值分别代入标准曲线计算该样本中内参基因和目的基因起始模板量,目的基因与内参基因起始模板量比值即是目的基因在该转基因植株中的拷贝数.计算结果为:单拷贝的有1株,2个拷贝1株,3拷贝和4拷贝的各有2株,其中有1株为假阳性植株.
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关键词
SYBRGreenI实时荧光定量PCRC_T值ptawx012转基因小麦拷贝数SYBR Green I real-time fluorescence quantitative PCRThreshold cycle (C_t)ptawx012 Transgenic wheatCopy number
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发布时间
2010-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
甘肃省科技攻关计划项目（(2GS035-A41-001-03)）
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