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甜菜夜蛾核多角体病毒BAC-TO-BAC外源基因表达系统的建立

Establishment of Spodoptera exigua Multicapsid Nucleopolyhedrovirus BAC-TO-BAC Expression System

摘要:

用直接克隆法将miniF-lacZ-attTn7-kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus, SeMNPV)美国分离株(SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内,miniF是大肠杆菌F因子复制子,携带miniF的重组病毒能够在大肠杆菌中低拷贝稳定复制,称为bacmid.由于SeUS1由不同的SeMNPV基因型组成,每个bacmid携带了一种病毒基因型,所有bacmid构成了SeUS1分离株的BAC文库.REN对111个bacmid分析表明,SeUS1分离株中除了包含具有完整SeMNPV遗传信息的基因型外,还包括不同类型的缺失基因型.将具有完整SeMNPV基因组的基因型SeBAC10转染昆虫细胞,可产生子代病毒,故SeBAC10是一种在真核细胞和原核细胞中均能复制的穿梭质粒.因为SeBAC10中多角体蛋白基因(Seph)被插入失活,将Seph作为报告基因通过位点特异性重组方式插入位于LacZ框内转座子Tn7的附着靶位点attTn7,得到重组SeBAC10 (即SeBAC10ph)转染甜菜夜蛾培养细胞Se301后,细胞出现典型的病理变化,核中出现多角体,证明SeMNPV BAC-TO-BAC外源基因表达载体系统构建成功.

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作者: 杨凯 [1] 庞义 [1]
期刊: 《生物工程学报》2003年19卷4期 412-418页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: Q784
栏目名称: 基因工程
DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2003.04.007
发布时间: 2004-01-08
基金项目:
国家重点基础研究发展计划(973计划) 国家高技术研究发展计划(863计划)
  • 浏览:157
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