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人纤溶蛋白酶原K5在毕赤酵母中的表达及其生物活性鉴定

Expression of rpK5 in Pichia pastoris and its Biological Activity Identification

摘要:

化学合成人纤溶蛋白酶原K5(pK5)的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上,将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选出对G418有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子.经摇瓶发酵和甲醇诱导后,用15%SDS-PAGE检测发酵上清液,表明有重组蛋白pK5的高表达.经CM-Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化,获得了纯度达到98%的rpK5.用MTT方法检测的结果表明,纯化的rpK5可显著地抑制人血管内皮细胞的生长.

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作者: 沈利 [1] 宋大新 [1] 高卜渝 [1] 吕红 [1] 李育阳 [1]
期刊: 《生物工程学报》2004年20卷6期 879-883页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: Q786
栏目名称: 基因工程
DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.06.013
发布时间: 2004-12-23
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