大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基体外分子交联-论文-万方医学网

大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基体外分子交联

In vitro Cross-linking of Escherichia coli Tartrate Dehydratase Beta Subunit

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摘要：

为证明高音等提出的蛋白质交联三步假说,通过PCR技术扩增大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基(L-tartrate dehydratase beta subunit,TtdB)野生型与Cys/Ser突变型目的基因,构建带6xHis标签的诱导型表达载体pTrcHisC-TtdB.重组蛋白以包含体形式存在,应用TALON固定化金属亲和树脂(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)以变性的方法纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性,复性率可达70%.将复性后的两种蛋白通过热诱导去折叠和氧化重折叠方法进行体外蛋白质分子交联实验.SDS-PAGE分析表明:野生型TtdB在其变性的临界温度反应时,出现交联二聚体和多聚体:在氧化重折叠后SDS-PAGE前加入100mmol/L DTT时,交联强度明显减弱.这种DTT打不开的交联即为异肽键交联;若在其氧化重折叠反应液中加入DTT则没有任何交联.突变型TtdB在与野生型TtdB相同的热诱导去折叠条件下,完全没有二聚体和多聚体的形成.这说明分子间二硫键的形成能促进随后分子间异肽键的形成.

作者：徐燕 ^[1] 高音 ^[2]

作者单位：山东医学高等专科学校生物化学教研室,临沂,276002 ^[1] 首都师范大学生命科学学院,北京,100037 ^[2]

期刊：《生物工程学报》2008年24卷8期 1485-1489页 MEDLINEISTICPKUCSCD

关键词：酒石酸脱氢酶β亚基蛋白质交联热诱导去折叠和氧化重折叠二硫键异肽键

主题词：氢(Hydrogen)蛋白(Egg White)热温度(Hot Temperature)大肠杆菌(Escherichia coli)基体(Basal Bodies)

分类号： R3

栏目名称： 研究简报

DOI： 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.08.027

发布时间： 2008-10-21

基金项目：

国家自然科学基金

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