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基于哺乳动物单杂交技术ERα调节剂高通量筛选模型的建立及应用

Development and application of a mammlian one hybrid-based high-throughput screening model for Era modulator

摘要:

雌激素受体α(Esuogen receptor α,ERα)是一种类固醇核受体,在机体的多种生理功能中起关键作用.为了筛选新的ERα调节荆,本研究建立一个基于哺乳动物单杂交的报告基因技术的高通量ERα调节剂筛选模型.利用RT-PCR技术从脂肪组织总RNA中扩增ERα配体结合N(Ligand binding domain,ERa LBD)基因序列.并插入含GALA DNA结合域的pBIND-GAL4表达质粒构建pBIND-GAL4-ERa(LBD)的嵌合表达质粒.该质粒与本室已构建好的含GALA响应元件和荧光素酶的报告质粒pGL3-GAL4共转染,通过测定荧光素酶的活性评价ER调节剂的转录调剂的活性.经过多种条件优化,激动剂阳性药对照雌二醇可以剂量依赖地诱导荧光素酶的表达,最大上调倍增数可达28.1倍,EC50为0.17 μmoi/L.拮抗剂阳性对照它莫昔芬可以有效地拮抗雌二醇的活性,最大下调倍数为6.3倍,EC50为0.1 μmol/L.该筛选模型可微量化于384孔板.且Z咽子均大于0.5.利用该模型从2000多个微生物和植物来源的天然产物以及合成化合物中筛选得到4个ERα激动荆.该模型灵敏、稳定,可以快速进行多种来源的ERα调节剂的筛选和活性评价.

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作者: 张倩 [1] 水小溪 [1] 范玉玲 [2] 郝伟丽 [1] 郑智慧 [3] 路新华 [2] 赵宝华 [1] 张华 [2] 贺建功 [2]
期刊: 《生物工程学报》2009年25卷7期 1088-1094页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: S8
栏目名称: 生物技术与方法
DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2009.07.020
发布时间: 2009-09-23
基金项目:
国家自然科学基金 国家重点基础研究发展规划(973计划)
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