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Ssp DnaB intein大肠杆菌中介导FVIII重链和轻链的连接

Ssp DnaB intein-mediated ligation of heavy and light chains of coagulation factor VIII in Escherichia coli

摘要:

研究利用intein的蛋白质反式剪接功能在大肠杆菌中对凝血VIII因子(FVIII)重链和轻链的连接作用,将B结构域大部分缺失型FVIII(BDD-FVIII)于满足剪接所需的保守性氨基酸Ser1657前断裂为重链和轻链,分别与split mini Ssp DnaB intein的106个氨基酸的N 端(Int-N)和48个氨基酸的C 端(Int-c)融合,构建到原核表达载体pBV220.诱导表达后SDS-PAGE分析可见预期大小的BDD-FVIII蛋白条带,Western blotting用FVIII特异性抗体证明其为剪接所产生的BDD-FVHI蛋白,表明intein可有效连接BDD-FVIII的重链和轻链.为进一步甲型血友病基因治疗研究应用intein以双腺相关病毒载体(AAV)携带FVIII基因,克服单个AAV载体的容量限制提供了依据.

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作者: 朱甫祥 刘泽隆 屈慧鸽 辛晓林 董洪新 刘相钦
期刊: 《生物工程学报》2009年25卷7期 1101-1106页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: Q93
栏目名称: 生物技术与方法
DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2009.07.022
发布时间: 2009-09-23
基金项目:
山东省自然科学基金 烟台市科技计划 教育部留学回国人员科研启动基金 鲁东大学科研启动经费项目
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