• 医学文献
  • 知识库
  • 评价分析
  • 全部
  • 中外期刊
  • 学位
  • 会议
  • 专利
  • 成果
  • 标准
  • 法规
  • 临床诊疗知识库
  • 中医药知识库
  • 机构
  • 作者
热搜词:
换一批
论文 期刊
取消
高级检索

检索历史 清除

医学文献 >>
  • 全部
  • 中外期刊
  • 学位
  • 会议
  • 专利
  • 成果
  • 标准
  • 法规
知识库 >>
  • 临床诊疗知识库
  • 中医药知识库
评价分析 >>
  • 机构
  • 作者
热搜词:
换一批

灵杆菌非特异性核酸酶的原核表达、纯化及活性分析

Expression, purification and characterization of non-specific Serratia nuclease in Escherichia coli

摘要:

以灵杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增非特异性核酸酶(Non-specific nuclease,NU)基因,并克隆到pMAL-c4X载体上构建重组表达载体pMAL-c4X-NU.经测序及BLASTN发现其与灵杆菌Serratia marcescens核酸酶基因的同源性为97%.将构建的表达载体pMAL-c4X-NU转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导实现了胞内表达78 kDa的麦芽糖结合蛋白-NU融合蛋白(Maltose-binding protein-NU,MBP-NU),其最佳诱导表达条件为37℃,0.75 mmol/LIPTG诱导1.5 h.用Amylose resin纯化得到了目的蛋白.活性检测表明MBP-NU具有同时降解DNA和RNA的活性,在37℃、pH 8.0时活性最高,比活力为1.11×106 U/mg,目标蛋白的纯化效率可达10.875 mg/L.纯化的目标蛋白中无蛋白酶活性存在.0.5 mmol/L乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、l mmol/L苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)以及150 mmol/L KCl对MBP-NU的活性几乎无影响,因此MBP-NU可作为蛋白质纯化过程中核酸的高效降解酶.

更多
作者: 陈鹏 [1] 杨海艳 [1] 李慧婧 [1] 杨龙雨 [1] 李学俊 [1]
期刊: 《生物工程学报》2011年27卷8期 1247-1257页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: Q51
栏目名称: 生物技术与方法
发布时间: 2011-12-06
基金项目:
西北农林科技大学基本科研业务费专项 国家自然科学基金
  • 浏览:149
  • 下载:0

加载中!

相似文献

  • 中文期刊
  • 外文期刊
  • 学位论文
  • 会议论文

加载中!

加载中!

加载中!

加载中!

特别提示:本网站仅提供医学学术资源服务,不销售任何药品和器械,有关药品和器械的销售信息,请查阅其他网站。

  • 客服热线:4000-115-888 转3 (周一至周五:8:00至17:00)

  • |
  • 客服邮箱:yiyao@wanfangdata.com.cn

  • 违法和不良信息举报电话:4000-115-888,举报邮箱:problem@wanfangdata.com.cn,举报专区

官方微信
万方医学小程序
new翻译 充值 订阅 收藏 移动端

官方微信

万方医学小程序

使用
帮助
Alternate Text
调查问卷