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乙肝病毒核心蛋白钉突部位基因工程改造对其功能的影响

Impacts on hepatitis B virus replication by gene engineering at apical loop region of capsid protein

摘要:

通过在乙肝病毒核心蛋白钉突部位插入标签蛋白EGFP及小片段多肽,研究各种改造对HBc功能的影响.采用RLIC方法,构建野生型HBc、HBc钉突部位带不同接头的EGFP融合重组体、缩短的EGFP融合重组体,并构建与HBc功能互补的质粒HBV1.1c-,将不同重组体与HBV1.1c-共转染HEK293细胞,通过观察荧光及Southern blotting检测病毒复制中间体,判断相应基因工程改造对重组蛋白中不同结构域功能的影响.RLIC方法可有效地用来进行片段缺失,且缺失片段大小及位置无明显限制.带柔性或刚性接头的重组HBc-EGFP均可产生绿色荧光,但荧光在细胞内分布形态不同,两种重组HBc-EGFP均不能支持正常的HBV复制,各种截短的插入片段以及aa79-80单独缺失体亦不能支持HBV复制.结果表明RLIC方法是一种基因工程改造的有力工具,不同类型接头对重组蛋白的结构和功能有不同影响,aa79-80对维持HBc的主要功能之一——支持HBV复制有重要作用.

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作者: 陈江燕 [1] 黄荣 [1] 陶颖 [1] 黄媛 [1] 罗英英 [1] 黄爱龙 [1] 胡接力 [1]
期刊: 《生物工程学报》2013年29卷11期 1663-1671页 MEDLINEISTICPKUCSCD
栏目名称: 生物技术与方法
发布时间: 2014-01-06
基金项目:
National Natural Science Foundation of China Natural Science Foundation Chongqing (No.cstc2011jjA10005).国家自然科学基金 重庆市自然科学基金
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