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重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性

Nuclease activity of the recombinant plancitoxin-1-like proteins with mutations in the active site from Trichinella spiralis

摘要:

旋毛虫plancitoxin-l-like (Ts-Pt)是旋毛虫125种DNase Ⅱ家族蛋白中唯一具有典型DNase Ⅱ活性区域HKD基序的核酸酶,且普遍认为,组氨酸位点是DNaseⅡ的活性氨基酸位点.为研究Ts-Pt活性位点突变体蛋白的核酸酶活性,利用重叠PCR方法获得Ts-Pt活性位点突变体片段,以pET-28a(+)为载体构建重组表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达.重组Ts-Pt突变体蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析.利用琼脂糖凝胶电泳法和核酸酶酶谱分析重组Ts-Pt突变体蛋白的核酸酶活性.成功构建含Ts-Pt突变体重组质粒的基因工程菌,SDS-PAGE和亲和层析纯化结果显示,重组Ts-Pt突变体蛋白呈包涵体表达.重组蛋白经复性后并没有表现出核酸酶活性,但核酸酶酶谱分析结果显示,包涵体表达的重组Ts-Pt突变体蛋白表现出降解DNA的能力.同时,N端和C端活性位点H及HCK和DHSK突变并不影响Ts-Pt的核酸酶活性,研究结果为进一步研究庞大的DNaseⅡ家族蛋白在旋毛虫发育和感染方面的作用提供一定的参考.

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作者: 廖成水 [1] 王晓利 [2] 田文静 [1] 张梦珂 [1] 张春杰 [1] 李银聚 [1] 吴庭才 [1] 程相朝 [3]
作者单位: 河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,河南洛阳,471023 [1] 河南科技大学医学院,河南洛阳,471023 [2] 河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,河南洛阳471023;洛阳职业技术学院,河南洛阳471099 [3]
期刊: 《生物工程学报》2017年33卷8期 1315-1324页 MEDLINEISTICPKUCSCD
栏目名称: 其他
DOI: 10.13345/j.cjb.170009
发布时间: 2017-09-27
基金项目:
National Natural Science Foundation of China Henan Science and Technology Key Project Key Project of Henan Province for Scientific Research Higher Education of China Colleges and Universities PhD Start-up Fund of Henan University of Science and Technology (No.13480071).国家自然科学基金 河南省科技攻关项目 河南省高等学校重点科研项目计划 河南科技大学博士启动基金项目
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