重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性
Nuclease activity of the recombinant plancitoxin-1-like proteins with mutations in the active site from Trichinella spiralis
旋毛虫plancitoxin-l-like (Ts-Pt)是旋毛虫125种DNase Ⅱ家族蛋白中唯一具有典型DNase Ⅱ活性区域HKD基序的核酸酶,且普遍认为,组氨酸位点是DNaseⅡ的活性氨基酸位点.为研究Ts-Pt活性位点突变体蛋白的核酸酶活性,利用重叠PCR方法获得Ts-Pt活性位点突变体片段,以pET-28a(+)为载体构建重组表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达.重组Ts-Pt突变体蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析.利用琼脂糖凝胶电泳法和核酸酶酶谱分析重组Ts-Pt突变体蛋白的核酸酶活性.成功构建含Ts-Pt突变体重组质粒的基因工程菌,SDS-PAGE和亲和层析纯化结果显示,重组Ts-Pt突变体蛋白呈包涵体表达.重组蛋白经复性后并没有表现出核酸酶活性,但核酸酶酶谱分析结果显示,包涵体表达的重组Ts-Pt突变体蛋白表现出降解DNA的能力.同时,N端和C端活性位点H及HCK和DHSK突变并不影响Ts-Pt的核酸酶活性,研究结果为进一步研究庞大的DNaseⅡ家族蛋白在旋毛虫发育和感染方面的作用提供一定的参考.
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