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途径工程及Tn5转座子介导突变提高大肠杆菌丙酮酸生产

Improvement of pyruvate production by Escherichia coli via pathway engineering and Tn5 transposon mediated mutagenesis

摘要:

为了开发丙酮酸高产菌株,以大肠杆菌MG1655为出发菌株,通过基因敲除阻断副产物途径构建了产丙酮酸大肠杆菌工程菌KLPP.进一步利用pUT Mini-Tn5载体进行转座子随机突变,构建了含有7 197个单克隆的突变体文库.使用基于丙酮酸的二硝基苯肼显色法,建立了96孔板-酶标仪快速筛选方法,经过两轮的筛选,成功筛选到了6个突变体菌株,比KLPP丙酮酸产量提高了38%、31%、19%、28%、44%和14%.利用全基因组重测序确定了其转座子插入的位置,进而确定了可能影响丙酮酸产量的基因位点,为后续菌株改造工作奠定了基础.

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作者: 史晓荣 [1] 刘俊 [1] 彭彦峰 [2] 李林 [2] 王文科 [3] 王钦宏 [2]
作者单位: 山西师范大学生命科学学院,山西临汾041004;中国科学院天津工业生物技术研究所中国科学院系统微生物工程重点实验室,天津 300308 [1] 中国科学院天津工业生物技术研究所中国科学院系统微生物工程重点实验室,天津,300308 [2] 山西师范大学生命科学学院,山西临汾,041004 [3]
期刊: 《生物工程学报》2017年33卷12期 1913-1922页 MEDLINEISTICPKUCSCD
栏目名称: 工业生物技术
DOI: 10.13345/j.cjb.170091
发布时间: 2018-08-14
基金项目:
天津市科技计划项目 中国科学院科技服务网络计划STS
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