不同修饰型hTERT启动子在多种肿瘤细胞中的转录活性研究
Study on the transcriptional activities of modified hTERT promoters in tumor cells
目的:对人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子进行不同修饰,然后对其在不同肿瘤细胞和原代培养的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)中的转录活性进行比较.方法:常规分子生物学方法克隆hTERT启动子区-378至+77之间序列和CWV增强子,采用SV40增强子、CWV增强子、SV40-CWV双增强子、Myc-Max反应元件(Myc-Max response elements,MMRE)、MMRE和SV40增强子联合对hTERT启动子分别进行修饰,分别构建其荧光素酶报告基因表达载体;采用脂质体Lipofectamine2000将重组质粒分别和pRL-CMV共转染不同肿瘤细胞和原代培养的牙龈成纤维细胞,双荧光素酶法检测hTERT启动子的转录活性.结果:酶切和测序鉴定hTERT启动子、CWV增强子克隆成功,以及荧光素酶表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示:野生型hTERT启动子不同肿瘤细胞中相对转录活性从 9.9%到24.4%有所不同,经不同修饰后活性大多有所提高,分别是野生型hTERT启动子的倍数:SV40增强子1.3至4.9倍;CWV增强子4.0至42.8倍;CWV和SV40联合增强子2.0至49.2倍;单一MMREO至5.5倍,MMRE和SV40增强子联合为1.2至8.4倍.野生型和修饰后的hTERT启动子在原代培养的牙龈成纤维细胞转录活性均较低.同一hTERT启动子在不同肿瘤细胞中转录活性不同.结论:不同修饰的hTERT启动子相对野生型hTERT转录活性大多有所提高,其中CMV增强子或SV40-CMV双增强子修饰的hTERT启动子提高幅度最大,用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力.
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