去唾液酸糖蛋白受体H1亚基CRD的原核表达、纯化及特性分析-论文-万方医学网

去唾液酸糖蛋白受体H1亚基CRD的原核表达、纯化及特性分析

Cloning, Expression, Purification and Immunoresponse Evaluation of the Carbohydrate Recognition Domain of H1 Subunit of the Asialoglycoprotein Receptor

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摘要：

目的研究去唾液酸糖蛋白受体H1亚基糖识别区(CRD)在大肠杆菌中的诱导表达,为从噬菌体抗体库中筛选其特异性抗体提供靶分子.方法以pET3-CRDH1为模板设计引物,通过PCR扩增CRDH1基因,采用分子克隆技术将其定向克隆至原核表达载体pET-32c中.将含CRDH1/pET-32c的BL21单菌落接种至LB肉汤培养基中培养,并通过IPTG诱导表达.表达产物经Ni2+螯合柱亲和纯化,采用免疫印迹技术(WB)分析融合蛋白的免疫反应性.结果表达产物经SDS-PAGE在35 kd左右显示条带,符合CRDH1与表达标签融合蛋白的理论值, 并证明以包涵体的形式表达; 通过Ni2+亲和柱纯化获得的CRDH1重组融合蛋白经WB证实,重组CRDH1融合蛋白能被羊抗人ASGPR血清特异性地识别.结论 rCRDH1在原核系统获得高效表达,亲和纯化的rCRDH1具有较强的免疫反应性,为进一步从噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体奠定了基础.

作者：乔健 ^[1] 黄建萍 ^[1] 曹利民 ^[2] 司进 ^[3]

作者单位：无锡市第三人民医院,江苏无锡,214041 ^[1] 华中科技大学同济医学院免疫学系,湖北武汉,430030 ^[2] 江苏省寄生虫病防治研究所,江苏无锡,214064 ^[3]

期刊：《苏州大学学报（医学版）》2006年26卷5期 717-719,724页 ISTIC

关键词：去唾液酸糖蛋白受体原核表达免疫反应性

主题词：去唾液酸糖蛋白受体(Asialoglycoprotein Receptor)免疫(Immunity)性(Sex)蛋白(Egg White)抗体(Antibodies)

分类号： R392-33

栏目名称： 基础研究

DOI： 10.3969/j.issn.1673-0399.2006.05.001

发布时间： 2006-11-30

基金项目：

卫生部科研项目

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