鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体胞外段原核表达载体的构建及表达鉴定
Construction and Identification of Recombinant Plasmid Encoding Extracellular Domain of FGFR-1 in Chicken
目的 构建重组原核表达载体以获得鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体(FGFR-1)胞外段活性蛋白,为进一步研制FGFR-1蛋白质肿瘤疫苗打下基础.方法 利用RT-PCR技术,从鸡胚肝中扩增出鸡的FGFR-1胞外段基因的cD-NA,用内切酶消化后插入原核表达质粒pQE30中.经过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定后,体外转化大肠埃希菌,用R-PCR和免疫印迹方法鉴定是否能够正确表达,同时利用Ni-NTA琼脂柱层析法纯化复性重组蛋白.结果 琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定证实PCR扩增的cDNA及构建的重组原核表达质粒pQE30-FGFR-1正确,并在大肠埃希菌中正确表达.经纯化后,进行SDS-PAGE电泳显示得到1条分子量约40 ku的蛋白质条带.结论 成功构建鸡FGFR-1胞外段原核表达载体并获得重组活性蛋白.
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