摘要[目的]观察沉默T细胞泛素连接酶(casitas B-lineage lymphoma-b,Cbl-b)基因对喉鳞癌细胞株Hep-2体外免疫的杀伤作用,并初步探讨其调控机制.[方法]采用脂质体转染法将Cbl-b-siRNA重组序列和随机阴性对照序列转染H9人T淋巴细胞,分别设为沉默组、阴性组,以不做任何处理T淋巴细胞为空白组.采用倒置荧光显微镜观察转染6h时转染效率;分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测并对比3组细胞中Cbl-b mRNA和蛋白表达情况;细胞计数试剂盒检测3组不同浓度对Hep-2细胞的杀伤作用; 流式细胞仪检测并对比3组T淋巴细胞表面活化分子CD69、CD25阳性表达率; 采用ELISA法检测并对比3组T淋巴细胞上清液中IL-2、INF-γ水平.[结果]沉默组和阴性组转染H9T淋巴细胞6 h后转染效率为(78.30± 6.06)％、(77.25±6.38)％,沉默组T淋巴细胞中Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量均显著高于空白组和阴性组(P＜0.05); 各组肿瘤细胞杀伤率随效靶比增加呈显著增加趋势(P＜0.05),沉默组不同效靶比肿瘤杀伤率均显著高于空白组和阴性组(P＜0.05),沉默组效靶比为40∶1时肿瘤细胞杀伤率最高,达(61.83±7.26)％.沉默组T淋巴细胞表面活化分子CD69、CD25阳性表达率均显著高于空白组和阴性组(P＜0.05);沉默组T淋巴细胞上清液中IL-2、INF-γ水平均显著高于空白组和阴性组(P＜0.05); 空白组与阴性组T淋巴细胞中Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量、肿瘤细胞杀伤率、表面活化分子CD69和CD25阳性表达率、上清液中IL-2及INF-γ水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]应用siRNA技术沉默T细胞Cbl-b基因可有效增强T细胞对人喉鳞癌细胞株Hep-2体外免疫杀伤作用,其中40∶1靶效比杀伤效果最佳,推测与下调Cbl-b mRNA和蛋白表达、促进T细胞表面活化分子表达及其细胞因子IL-2、INF-γ分泌有关.