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沉默结直肠癌细胞Lgr5表达对血管生成的影响

摘要:

目的 研究Lgr5 shRNA重组质粒沉默结直肠癌细胞中Lgr5表达对血管生成的影响.方法 针对Lgr5 mRNA构建Lgr5 shRNA重组质粒,通过实时荧光定量PCR和western blot方法筛选出在SW620细胞中抑制效率最高的重组质粒;将筛选出的重组质粒和阴性对照重组质粒瞬时转染进SW620细胞,48h后收集条件培养基.用条件培养基培养hMVECs细胞,观察hMVECs细胞在Matrigel上毛细血管管腔样结构的形成情况;将吸附了相应条件培养基的明胶海绵置于鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,72 h后利用Image Pro Plus6.0采集数据并计算各组CAM血管面积比.结果 在4种Lgr5 shRNA重组质粒中Lgr5 shRNA 874在SW620细胞中对Lgr5 mRNA和蛋白的抑制程度最高,分别为64.7%和44.7%.Lgr5 shRNA 874组条件培养基培养hMVECs后Matrigel上的管腔数目显著少于NC组(P=0.002).条件培养基作用于CAM 72h后,Lgr5 shRNA 874组CAM上微小血管数目较无血清培养基(SFM)组和NC组显著减少,Lgr5shRNA 874组血管面积比与SFM组和NC组相比,差异有统计学意义(P值均为0.000).结论 沉默结直肠癌细胞中Lgr5表达后能显著抑制hMVECs毛细血管管腔样结构的形成,同时可以抑制CAM模型上微小血管生成,证实了抑制结直肠癌细胞中Lgr5表达对体外血管生成有一定的抑制作用.

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作者: 王保才 [1] 彭亮 [1] 梁燕 [1] 张昱 [1] 苏宁 [1] 王新颖 [1] 姜泊 [1]
分类号: R735.3
栏目名称: 短篇论著
DOI: 10.3969/j.issn.1672-2159.2011.05.008
发布时间: 2012-01-18
  • 浏览:210
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