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无病毒可回复性肝细胞永生化载体的构建和结构鉴定

Construction and characterization of a vector for virus-free hepatocyte reversible immortalization

摘要:

目的 构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体,优化目前的肝细胞永生化方法.方法 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体,PCR扩增attB1-Kozak -hTERT(前端)-attB2和attB1 -hTERT(后端)/E2A/eGFP/F2A/neo-attB2,对相应大小条带切胶回收后,通过Gateway重组克隆技术BR反应和LR反应,以及酶切连接,构建最终目的载体PB -hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo.结果 PCR及酶切和测序鉴定均证实成功构建了肝细胞永生化载体PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo,目的基因序列与GenBank报道一致.结论 成功构建不携带病毒基因且可实现回复的肝细胞永生化载体,有望提高永生化肝细胞临床应用的安全性.

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作者: 李爱民 [1] 王亚东 [1] 王泽楠 [1] 张洁 [1] 罗晓蓓 [1] 燕群 [1] 白杨 [1] 林建华 [2] 刘思德 [1]
分类号: R657.3
栏目名称: 论著
DOI: 10.3969/j.issn.1672-2159.2012.02.001
发布时间: 2012-10-29
基金项目:
广东省教育部产学研结合项目 广东省科技计划项目 广东省高等学校人才引进专项资金项目
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