结核杆菌含信号肽的Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建及鉴定
CONSTRUCTION AND IDENTIFICATION OF THE CHIMERIC MS/HIL12 EUKARYOTIC EXPRESSION PLASMID
目的:克隆含信号肽的Mtb8.4(MS)/hIL12嵌合基因,构建其真核表达质粒,并进行鉴定.方法:以pcDNA3.1(+)-含信号肽的Mtb8.4(pMS)质粒为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增出MS-linker基因,与pCI-neo载体进行连接重组,构建成pCI-neo-MS-linker(pMSL)重组质粒,然后以pORF-hIL12质粒为模板,经PCR扩增出hIL12基因,将hIL12基因与pMSL质粒进行连接重组,构建成MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等方法进行鉴定.结果:MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功.结论:MS/hIL-2嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病MS/hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础.
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