腺病毒介导LMP-1基因治疗骨缺损的实验研究
EXPERIMENT OF TREATMENT OF BONE DEFECT WITH ADENOVIRUS-MEDIATED EXPRESSION OF LMP-1 GENE
[目的]探讨以PLGA为支架,用含腺病毒介导的LNP-1修饰BMSCs修复胫骨缺损的可行性.[方法]分离兔骨髓间充质干细胞;应用AdEasy腺病毒载体系统构建人LMP-1基因的腺病毒重组体,并检测感染病毒的兔骨髓间充质干细胞.测定LNP-1阳性细胞的数量,测定各组细胞ALP、OC、COL1表达.建立胫骨近端骨缺损新西兰大白兔模型,以PLGA为支架材料,分为4组:Ad LMP-1转染组、AdLaeZ转染组、空白组和阳性对照组.术后2周、4周、8周每组处死动物,动态观察并比较缺损区新骨面积,分析其在骨缺损修复过程中的作用.[结果]成功分离兔MSC.同源重组成功构建AdLMP-1.体外实验MTT法分析表明AdLIVIP-1对MSC增殖无明显作用.AdLMP-1可促进OC和I型胶原蛋白的合成和分泌.第4、8周时阳性对照组和AdLMP-1转染组的成骨量明显增高(P<0.05),随时间延长,成骨均以线性增长,AdLMP-1转染组的成骨量则显著高于阳性对照组(P<0.05).Ad-Lacz转染组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05),第4、8周时尤为明显.说明AdLMP-1可促进成骨量增加.[结论]构建的Ad LNP-1能高效转染MSCs,且转染后的细胞能促进OC和I型胶原蛋白的合成和分泌.PLGA为支架携带腺病毒介导的LMP-1的BMSCs具有明确的骨缺损修复能力,为临床促进骨折愈合提供了一种有效的方法和材料.
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