大肠杆菌O157∶H7双重荧光PCR方法的建立与应用
Establishment and application of a dual real-time PCR for the detection of Escherichia coli O157:H7
目的 建立快速检测食品中大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法.方法 针对大肠杆菌O157:H7菌体抗原O和鞭毛抗原H的特异性基因rfbE (O157)和fliC (H7)筛选设计引物和探针,优化反应条件,建立可特异性检测大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行评价,对模拟样品和实际样品进行初步验证.结果 利用建立的方法对2株大肠杆菌O157:H7及12株非大肠杆菌O157:H7进行检测,O157:H7菌株检测结果均为rfbE和fliC阳性,非O157:H7菌株检测结果均为阴性,rfbE和fliC基因的特异性均为100%;2基因的检测灵敏度可达1.16×102 CFU/ml;批内、批间变异系数均小于3.5%;模拟样品立即检测,2个基因的最低检出限(2.7×102 CFU/ml)和细菌纯培养时接近;实际样品检测结果与我国检验检疫行业标准(SN/T 0973-2010)的检测结果一致.结论 建立的荧光定量PCR方法特异性及重复性好,灵敏度高,可快速准确鉴定大肠杆菌O157:H7菌株.
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