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慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究

Investigation of gene interference of TLR2 mediated by lentivirus vector in corneal epithelial and stromal cells of rats

摘要:

目的 观察慢病毒载体(lentiviral vector,LV)介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞(corneal epithelial cell,CEC)和基质细胞(corneal stromal cell,CSC)的有效性和安全性.方法 分别培养大鼠CEC和CSC,转染组用携带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和TLR2小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)的LV转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的LV.转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为10、50、100、200加入LV-TLR2-siRNA-eGFP,选择eGFP表达最强的MOI进行后续实验,观察细胞形态,CCK8检测细胞增殖情况.流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,RT-PCR检测转染后TLR2 mRNA的表达情况.结果 MOI=200时转染CEC和CSC荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;CCK8结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的IOD值差异均无统计学意义(均为P>0.05);流式细胞仪检测CEC和CSC转染效率分别为77.600%±1.100%和76.300%±1.387%,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.001).RT-PCR检测转染后CEC和CSC TLR2mRNA相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义(均为P<0.001).结论 LV-TLR2-siRNA-eGFP可在体外稳定有效转染CEC和CSC,且对细胞安全性无影响,可有效下调TLR2 mRNA的表达.

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作者: 梁伟怡 [1] 白浪 [1] 刘晶 [1] 苏亚茹 [1] 于健 [1] 刘琼 [1] 杨娟 [1]
期刊: 《眼科新进展》2015年35卷12期 1101-1104页 ISTICPKU
栏目名称: 实验研究
DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2015.0302
发布时间: 2016-12-29
基金项目:
国家自然科学基金资助 南方医科大学南方医院横向课题匹配基金资助 National Natural Science Foundation of China Horizontal Topic Matching Funds of Nanfang Hospital of Southern Medical University
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