慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究
Investigation of gene interference of TLR2 mediated by lentivirus vector in corneal epithelial and stromal cells of rats
目的 观察慢病毒载体(lentiviral vector,LV)介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞(corneal epithelial cell,CEC)和基质细胞(corneal stromal cell,CSC)的有效性和安全性.方法 分别培养大鼠CEC和CSC,转染组用携带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和TLR2小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)的LV转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的LV.转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为10、50、100、200加入LV-TLR2-siRNA-eGFP,选择eGFP表达最强的MOI进行后续实验,观察细胞形态,CCK8检测细胞增殖情况.流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,RT-PCR检测转染后TLR2 mRNA的表达情况.结果 MOI=200时转染CEC和CSC荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;CCK8结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的IOD值差异均无统计学意义(均为P>0.05);流式细胞仪检测CEC和CSC转染效率分别为77.600%±1.100%和76.300%±1.387%,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.001).RT-PCR检测转染后CEC和CSC TLR2mRNA相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义(均为P<0.001).结论 LV-TLR2-siRNA-eGFP可在体外稳定有效转染CEC和CSC,且对细胞安全性无影响,可有效下调TLR2 mRNA的表达.
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