换一批白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控
Construction of interleukin-10 gene-modified rabbit ad-ipose derived mesenchymal stem cells and its immuno-modulatory effects on autologous peripheral blood Th17 cells
摘要目的 探究白细胞介素10(interleutin 10,IL-10)基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)对自体外周血Th17细胞的免疫调控作用.方法 构建IL-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells,IL-10-ADSCs)及荧光蛋白标记的兔脂肪来源间充质干细胞(green fluorescent protein-adipose mesenchymal stem cells,GFP-ADSCs),定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)及Western blot检测细胞IL-10基因及蛋白表达水平.分离培养兔泪腺上皮细胞及自体外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立淋巴细胞体外激活共培养体系,分组按PBMCs:ADSCs为5:1的比例加入等量ADSCs、IL-10-ADSCs及GFP-ADSCs,同时以等比例的成人真皮成纤维细胞-α作为对照组,Q-PCR检测各组Th17细胞相关基因mRNA表达水平.结果 成功构建IL-10-ADSCs和GFP-ADSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green flu-orescent protein,GFP)表达率达80％以上.Q-PCR及Western blot检测结果显示,IL-10-ADSCs组IL-10 mRNA及蛋白表达水平均高于GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05).与对照组相比,ADSCs组、IL-10-ADSCs组及GFP-ADSCs组均可降低兔外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17及转录因子维甲酸相关孤独受体C mRNA表达水平(均为P<0.05),且IL-10-AD-SCs组降低效果显著高于ADSCs组及GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 IL-10-ADSCs可抑制Th17细胞分化相关基因的表达水平,具有抑制Th17细胞分化的潜能.
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