Gβ/Gαq-PI3K-PKC信号通路在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的作用
Differential roles of Gβ/Gαq-PI3K-PKC signaling pathway in the reg-ulation of 3T3-L1 pre-adipocyte differentiation
目的:观察3T3-L1脂肪细胞分化过程中G蛋白亚单位、磷脂酰肌醇3激酶(P13K)亚单位和蛋白激酶C(PKC)亚型蛋白表达的时序性变化规律,探讨GB/Gaq-PDK-PKC信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用.方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞,采用经典激素鸡尾酒诱导法(分化诱导剂1-甲基3-异丁基黄嘌呤+地塞米松+胰岛素)诱导分化,并以加入诱导分化液的时间为起点,于0 d、6 h、12 h、1 d、3 d、6 d、9 d收集细胞后立即进行蛋白抽提,用Western blotting分别检测细胞中G13、Gaq/11、P13K-IA类和IB类部分亚单位磷酸化水平、磷酸化PKCct和S的表达变化.结果:诱导分化进程中:6 h时,各检测信号物质表达均不同程度升高;12 h时,磷酸化P13K-P85、p110γ表达达高峰(P<0.05),Gβ明显升高(P<0.05),p101轻度升高,磷酸化PKC水平有所下降;1 d时,Cβ表达达高峰(P<0.01),P13K-p85总水平及磷酸化P13K-p85、p55、p110γ、p101开始不同程度下降,Gaq/11和磷酸化PKCα继续升高(P<0.01);3d时,Gα/11和磷酸化PKCa表达达高峰(P<0.01);6d时,Gαq/11和磷酸化PKCct表达仍维持在较高水平,PKCs明显降低(P<0.01);成熟脂肪细胞内(分化9 d)磷酸化p55、p85和PKCS水平分别是前脂肪细胞的33.55%(P<0.01)、29.68%(P<0.05)和45.52%(P<0.05).结论:Gβ/Caq-P13K-PKC信号通路检测信号分子于分化早期出现峰值,提示与细胞早期分化的克隆性增殖阶段密切相关,而磷酸化p55、p85和PKCζ亚单位在成熟脂肪细胞较前脂肪细胞水平显著下调提示其在分化后期对细胞分化起抑制性作用.
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