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野生型和突变型nm23-H1基因原核表达载体的构建、表达及纯化

Construction, Expression and Purification of Wild and Mutant Type of nm23-H1 in Prokaryotic Expression System

摘要:

背景与目的 nm23-H1基因是一个肿瘤转移抑制基因,但关于nm23-H1基因抑制肿瘤转移的生化机理目前并不清楚.该实验目的就是构建nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化.方法 通过PCR方法扩增野生型和突变型nm23-H1目的片断,利用基因重组技术构建pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,鉴定正确克隆转化BL21(DE3)溶源菌,进行蛋白表达及可溶性分析,同时采用镍柱亲和层析法进行纯化,应用Western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测.结果 通过酶切和测序鉴定,pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体序列正确,编码框正确.转化溶源菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,且均为可溶性蛋白,Western blot检测结果提示野生型和突变型nm23-H1蛋白分子量为20 kDa,与预计值相符.结论 成功构建pET28a-nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,所表达蛋白可用于下一步实验研究.

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作者: 杨雪琴 [1] 范羽 [2] 陈军 [2] 刘红雨 [2] 马力 [2] 朱大兴 [2] 王东 [3] 王阁 [3] 周清华 [2]
期刊: 《中国肺癌杂志》2009年12卷1期 23-27页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: R734.2
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2009.01.003
发布时间: 2009-04-08
基金项目:
国家自然科学基金重点项目 国家自然科学基金 高等学校博士学科点专项科研基金 国家科技攻关项目
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