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背景 与目的恶性胸腔积液(malignant plural effusion,MPE)是液体活检基因检测的常用标本来源,本研究评估一种从大体积MPE中分离肿瘤细胞方法的分离效果及其在基因检测中的应用前景.方法 收集20例伴MPE的晚期肺癌患者一次胸腔积液引流的全部MPE(>500 mL),联合运用细胞分离介质Percoll和Ficoll分离肿瘤细胞,统计分离情况.对其中既往行组织基因检测的肺腺癌患者,分别使用胸腔积液上清游离DNA(tumor derived DNA from pleural effusion supernatant,etDNA),总细胞DNA及分离肿瘤细胞DNA(DNA from tumor cells in pleural effusion,ETC-DNA)3种成分进行二代基因测序,比较检测情况.结果 从MPE中分离得到细胞中位数量8.50×104个(上下四分位间距9.25×103-3.75×105),肿瘤细胞纯度85.50％±5.80％.对10例既往行组织表皮生长因子受体(epidermal growth fac-tor receptor,EGFR)基因检测的患者,etDNA、总细胞DNA及ETC-DNA EGFR基因突变检出率分别为70.00％、50.00％、70.00％.ETC-DNA基因检测阳性率与组织(P>0.999,kappa=1.000)和etDNA(P>0.999,kappa=1.000)一致性均良好.etDNA、总细胞DNA、ETC-DNA EGFR基因突变中位丰度分别为16.05％(4.78％-43.06％)、1.09％(0.00％-2.39％)和33.02％(18.50％-76.70％).ETC-DNA检测丰度倾向高于etDNA,但差异无统计学意义.结论 该提取方法可以有效地从大体积MPE中分离出大量高纯度肿瘤细胞,利用提取出的肿瘤细胞进行基因检测可能可以提高基因检测效能,值得进一步研究.