换一批金葡菌野生株肠毒素B基因克隆及分子特征
Cloning and molecular characteristics of enterotoxin B gene from wild staphylococcus aureus strain
摘要目的克隆金黄色葡萄球菌野生株S407030肠毒素B(SEB)基因,并分析其分子特征.方法根据Genebank中金黄色葡萄球菌S6株肠毒素B基因设计1对引物,采用PCR法从金黄色葡萄球菌野生株S407030基因组中扩增目的基因,将目的片段与pMD-18T载体连接构建重组子pMD-18T-SEB,并转化E.coli DH5 a;阳性克隆以双酶切鉴定后,双脱氧末端终止法作序列测定分析,并以ExPasy Proteoic Tools蛋白分析软件预测其编码SEB蛋白的二级结构.结果从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出约705bp的基因片段,所构建的阳性克隆重组子PCR及双酶切鉴定与预期结果一致;测序结果表明,克隆的SEB基因含705个碱基,与S6株序列相比无碱基的插入或缺失,同源性为98.4%;存在11个碱基变异,其中7个为无义突变,4个为有义突变(突变位点位于第364,699,899,988位,编码氨基酸变化分别为:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser、Met→Leu);所预测的2菌株SEB蛋白的二级结构基本相同.结论本实验成功克隆了金葡菌野生株S407030SEB基因,其在不同菌株间相对保守;由SEB基因点突变引起的个别氨基酸的改变对SEB生物活性与毒力的影响有待进一步研究.
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DOI
10.3321/j.issn:1001-0580.2006.01.034
发布时间
2006-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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