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HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达

Construction of HSV-2 eukaryotic expression plasmid pCDNA3.0-ICP27 and expression in Vero cells

摘要:

目的 构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA 3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达.方法 提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中.pCDNA3.0-ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经RT-PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达.结果 pCDNA3.0-ICP27经双酶切可切出目的 片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致.转染后经RT-PCR和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达.结论 成功构建了HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并能在Veto细胞中表达.

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作者: 龙朝钦 [1] 杨慧兰 [1] 张发洲 [1] 薛礼长 [1]
第一作者: 龙朝钦
分类号: R752.1+1
栏目名称: 论著
DOI: 10.3969/j.issn.1671-9638.2011.02.001
发布时间: 2011-07-04
基金项目:
国家自然科学基金 全军医学科学技术研究"十一五"计划资助项目
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