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细胞穿透肽 CCL 融合蛋白的构建与表达

Construction and expression of cell-penetrating peptide CCL fusion protein expression vector

摘要:

目的:评估细胞穿透肽 CCL 融合蛋白构建的可能性。方法将 CCL6-PEP-6XHis 构建至 pABP 质粒,然后提取 pABP-CCL6-PEP 质粒进行人胚肾 HEK293细胞转染表达,以及 CCL6-PEP-6XHis 蛋白层析纯化和检测。结果成功构建并纯化细胞穿透肽 CCL 融合蛋白。将 CCL6-PEP-6XHis Tag 基因经 PCR 扩增、接入 T 载体、克隆、培养,并提取质粒进行测序鉴定,所得序列与目的基因一致。成功将 CCL6-PEP-6XHis 基因构建至哺乳动物细胞表达载体 pABP 中,经质粒提取和酶切鉴定,电泳结果显示,HindⅢ+ XbaⅠ切出约430 bp 的条带,符合预期,酶切鉴定正确。蛋白质印迹法(Western Blot)检测结果阳性,表明纯化得到的目标蛋白带有 hisx6标签。结论细胞穿透肽 CCL 融合蛋白能够人工构建,并通过真核细胞进行表达。

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