寨卡病毒包膜蛋白重组人腺病毒5型载体的构建与免疫原性测定-论文-万方医学网

寨卡病毒包膜蛋白重组人腺病毒5型载体的构建与免疫原性测定

Construction and immunogenicity detection of recombinant human adenovirus type 5 vector containing ZIKV envelope protein

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摘要：

目的以腺病毒5型载体(Ad5)构建含寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白(prM-E)的复制缺陷型5型重组腺病毒(rAdS)表达载体,测定prM-E在细胞中的表达及对小鼠的免疫原性.方法从ZIKV毒株Z16006(亚洲型)分离获得prM-E基因片段,以重组腺病毒AdMaxTM系统包装重组腺病毒rAd5/prM-E.选用C57BL/6小鼠,以rAd5/prM-E 107、108和109 PFU三个剂量肌内注射免疫小鼠,在第3周同等剂量加强免疫一次,第5周从小鼠眼球取血并分离脾淋巴细胞.分别以ELISpot和ELISA方法测定小鼠对ZIKV prM-E的体液与细胞免疫反应.结果成功构建复制缺陷型重组腺病毒载体rAd5/prM-E,采用Western blot方法和抗ZIKV E抗体检测rAd5/prM-E感染的293A细胞表达产物,可见与E蛋白相应的56 kDa蛋白带.以ELISpot方法测定小鼠脾淋巴细胞特异性IFN-γ分泌细胞形成斑点数(SFCs),结果分别为(688.54±186.43)、(1084.90±144.14)和(1 640.20±147.13) SFCs/106脾细胞,与病毒接种剂量呈正比关系;采用ELISA测定免疫小鼠血清中抗E抗体,其滴度(log10值)分别为(3.14±0.39)、(3.50±0.30)和(3.74±0.25),均高于对照组小鼠(0.80±0.17),差异具有统计学意义(P＜0.001).结论 rAd5/prM-E具有感染小鼠并诱导小鼠产生强烈的特异性抗体和细胞免疫反应的能力,表明prM-E具有良好的免疫原性,为ZIKV候选疫苗研制提供了可靠的免疫源.

作者：马晓瑞 ^[1] 罗升学 ^[1] 王一琳 ^[1] 张攀丽 ^[1] 刘博超 ^[1] 赵卫 ^[2] 李婷婷 ^[1] 黎诚耀 ^[1]

作者单位：南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系,广东广州,510515 ^[1] 南方医科大学公共卫生与热带医学学院三级生物安全实验室,广东广州,510515 ^[2]

期刊：《中国感染控制杂志》2019年18卷6期 474-480页 ISTICPKUCSCD

关键词：寨卡病毒 prM-E蛋白腺病毒载体免疫原性

主题词：免疫(Immunity)蛋白(Egg White)性(Sex)寨卡病毒(Zika Virus)小鼠(Mice)

分类号： R373.9 R446.6

栏目名称：论著

DOI： 10.12138/j.issn.1671-9638.20195328

发布时间： 2019-08-12

基金项目：

国家重点研发计划基金项目

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