摘要目的 构建靶向小鼠核因子κB(NF-κB)P65进行RNA干扰(RNAi)的逆转录病毒载体，鉴定其生物学效应。方法 采用分子克隆技术构建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA的逆转录病毒载体，转染293E细胞，包装成逆转录病毒，以不同滴度感染小鼠单核巨噬细胞J774A.1，用相同浓度的脂多糖(LPS)刺激，在不同时间点用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平上检测细胞NF-κBP65表达，并用RT-PCR和ELISA方法 检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果 成功构建靶向小鼠NF-κB P65基因的小干扰RNA逆转录病毒表达载体。经LPS刺激后,siRNA病毒组J774A.1细胞中NF-κB P65 mRNA的表达明显受到抑制，2 h即明显低于Scramble病毒组(0.91±0.03比1.02±0.02,P＜0.01)，此后持续降低；在LPS刺激后的24、36、48和72 h，siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达均明显低于Scramble病毒组(0.97±0.02比1.01±0.01，0.94±0.01比1.02±0.01，0.94±0.02比1.02±0.01，0.93±0.01比1.00±0.02，P＜0.05)。LPS刺激后2、6、12和24h，siRNA病毒组TNF-α的mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(P＜0.01)，而相同时间点siRNA病毒组细胞上清TNF-α的含量亦明显低于Scramble病毒组(P＜0.01)。结论 将小干扰RNA片段连接到空白质粒中构建逆转录病毒表达载体的方法 是可行的。采用RNA干扰技术抑制NF-κB的表达后，可以减少其下游炎症因子的释放，提示RNA干扰技术在炎性损伤性疾病如急性肺损伤的防治中具有潜在应用价值。