shRNA稳定抑制XIAP和survivin表达对胰腺癌细胞生物学特征的影响

Influence of stable inhibition of XIAP and survivin expression on biological characteristics of pancreatic cancer cells

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摘要目的:探讨慢病毒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术对胰腺癌细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素( survivin)的抑制作用及对胰腺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:应用pGCSIL-PUR和pGCSIL-NEO分别构建针对XIAP和survivin的shRNA慢病毒载体,转染胰腺癌细胞株SW1990和Panc-1,经嘌呤霉素和新霉素筛选并扩大培养得到稳定转染株；实时荧光定量PCR和Western blot检测胰腺癌细胞内XIAP和survivin的表达；MTT法检测细胞增殖和化疗敏感性；caspase-3/7活性测定和DAPI染色分析细胞凋亡情况.结果:筛选XIAP和survivin的有效干扰靶点后,获得XIAP和survivin表达稳定抑制的SW1990和Panc-1细胞株.MTT检测显示稳定抑制XIAP或survivin后,两种胰腺癌细胞增殖均明显减弱,且两者联合抑制后作用增强；虽然抑制XIAP或survivin后对两种胰腺癌细胞凋亡无明显影响,但能明显增加其对化疗药物(5-FU,吉西他滨)的敏感性,且两者联合抑制后作用明显增强.结论:慢病毒载体介导的靶向XIAP和survivin的RNAi可有效抑制XIAP和survivin的表达,降低胰腺癌细胞的增殖能力并增强其对化疗药物的敏感性,且两者联合具有协同作用.