超声介导微泡破裂法对VEGF体外转染成纤维细胞蛋白表达影响的实验研究
Experimental study on protein expression when transferring VEGF gene into the fibroblast by ultrasound-mediated microbubbles destruction in vitro.
目的 利用ELISA检测法观察诊断剂量的超声介导微泡破裂法对VEGF体外转染成纤维细胞蛋白表达的影响并探讨该种转染方法的最佳超声条件.方法 实验分组:单纯VEGF质粒转染组;超声+造影剂微泡+VECF质粒转染组,该组并根据MI(机械指数)分为三组1.2;1.4;1.6.转染后利用ELISA法对各组成纤维细胞的VEGF蛋白表达进行定量检测;利用锥虫蓝染色法比较不同超声强度对细胞活性的影响.结果 VEGF质粒转染成纤维细胞后,24h开始即有较高水平的VEGF蛋白表达,表达量于48h、72h呈下降趋势;超声+造影剂微泡+VEGF质粒组(MI1.4、1.6)细胞VEGF蛋白表达量最高,但2组间差异无显著性(P>0.05);以上2组与单纯质粒转染组及MI为1.2组比较有显著性差异(P<0.01);超声+造影剂(MI1.2)组与单纯质粒转染组亦有显著性差异(P<0.05).锥虫蓝染色法显示:随着超声强度的增加,细胞死亡率呈上升趋势.结论 诊断剂量的超声介导微泡破裂转染法能够提高VEGF体外转染成纤维细胞蛋白的表达;使用的超声剂量大,转染率高,但细胞损害大;反之,细胞损伤小,转染率低.
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