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玫瑰树碱对脂多糖诱导RAW264.7细胞的炎症抑制作用

Inhibitory effects of Ellipticine on inflammation in lipopolysaccharide-induced RAW264.7 cells

摘要:

目的 探讨天然生物碱玫瑰树碱(ELL)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7的炎症抑制作用及机制.方法 取对数生长期RAW264.7细胞,给予0.05、0.5、5μmol/L的ELL或10 mg/L的LPS单独或联合作用于细胞,同时设空白对照组;作用12 h后用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中炎性因子含量,确定ELL最佳浓度用于后续实验.用10 mg/L的LPS刺激RAW264.7细胞致炎后,用5μmol/L的ELL进行干预,作用2、4、6、12 h时用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中炎性因子的mRNA表达;作用15 min、30 min、1 h、2 h时用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测核转录因子-κB p65(NF-κB p65)入核情况以及总蛋白的细胞外信号调节激酶(ERK)、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、激活蛋白-1(AP-1)亚基c-fos和c-jun的磷酸化水平.结果 ① 用0.05、0.5、5μmol/L的ELL或10 mg/L的LPS作用于RAW264.7细胞后的增殖情况与空白对照组比较差异无统计学意义,说明该浓度范围内ELL对细胞无明显毒性,也不会因两种药物的相互作用而影响细胞的增殖能力.与空白对照组比较,LPS刺激后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平均明显升高;而不同浓度ELL可呈剂量依赖性地降低炎性因子水平,以5μmol/L的ELL抗炎效应更强.② 与空白对照组比较,LPS刺激后TNF-α、IL-6的mRNA表达水平显著升高,NF-κB p65入核增多,ERK、p38MAPK、JNK、c-fos、c-jun的磷酸化水平明显升高.而ELL可逆转TNF-α、IL-6的mRNA表达及JNK、c-fos、c-jun的磷酸化水平〔TNF-αmRNA(2-ΔCt):2 h为2.45±0.19比3.41±0.32,4 h为1.20±0.11比2.11±0.21,6 h为1.68±0.09比2.51±0.31;IL-6 mRNA(2-ΔCt):6 h为3.41±0.52比4.10±0.38,12 h为1.61±0.08比3.91±0.25;p-JNK/GAPDH:1 h为0.557±0.034比1.049±0.056,2 h为0.439±0.040比0.855±0.038;p-c-fos/GAPDH:1 h为0.158±0.030比0.741±0.035,2 h为0.156±0.015比0.932±0.030;p-c-jun/GAPDH:1 h为0.425±0.036比0.802±0.059,2 h为0.345±0.075比0.952±0.068;均P<0.05],但对NF-κB p65入核及ERK、p38MAPK的磷酸化水平无明显影响.结论 ELL可抑制LPS活化的RAW264.7细胞中IL-6、TNF-α生成,可能是通过抑制JNK-AP-1信号轴来实现的.

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作者: 周晓英 [1] 田李星 [2] 黄祺 [2] 梁华平 [2] 邬于川 [1]
作者单位: 西南医科大学基础医学院, 四川泸州,646000 [1] 400042 重庆,陆军军医大学第三附属医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 [2]
期刊: 《中华危重病急救医学》2018年30卷8期 731-736页 MEDLINEISTICCSCDEMBase
栏目名称: 感染与脓毒症
DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-4352.2018.08.004
发布时间: 2018-10-10
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