人胚胎干细胞培养及其cDNA文库的构建

Construction and characterization of a cDNA library from human embryonic stem cells

二维码有效期 120s

摘要目的构建人胚胎干细胞cDNA文库,为筛查疾病抗原基因奠定基础.方法培养和收集人胚胎干细胞克隆,提取胚胎干细胞总RNA,分离纯化mRNA,利用mRNA作模板反转录合成双链cDNA,双链DNA经pfu-DNA聚合酶将链末端补平,与EcoRⅠ接头连接,XhoⅠ酶切消化产生粘端.用Sepharose CL2B柱分离纯化及除去小分子cDNA片段,与Uni-ZAP XR噬菌体连接,体外转化XL1-blue MRF菌,建成cDNA文库并计算重组效率.对cDNA文库进行扩增,测定扩增文库的滴度.阳性重组子用EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切鉴定插入片段的大小.结果构建成含1.2×106重组子的人胚胎干细胞cDNA文库,重组子插入外源DNA片段长度不小于1000 kb.结论已成功构建人胚胎干细胞cDNA文库,适合用于筛选目的基因克隆.

作者周素芳 ^[1] Angela M Eastham ^[2] Peter L Stern ^[2] 学术成果认领

作者单位广西医科大学生物化学与分子生物学教研室,广西南宁,530021 ^[1] Cancer Research UK Immunology Group, Paterson Institute for Cancer Research, Christie Hospital NHS Trust, Manchester, UK. ^[2]

关键词人胚胎干细胞 cDNA文库分子克隆

主题词人胚胎干细胞(Human Embryonic Stem Cells)克隆, 分子(Cloning, Molecular)目的(Goals)基因(Genes)疾病(Disease)

分类号 R34

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.17.001

发布时间 2007-11-12

基金项目

广西自然科学基金（桂科自 0728121）