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用EBV转化的肝癌患者B细胞构建噬菌体单链抗体库

Construction of phage antibody library using sensitized in vitro B-lymphocytes of liver cancer patients

摘要:

目的 构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库.方法 体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC.用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因.将ScFv基因与载体连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库.结果 经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCK,扩增出6种vH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因.将ScFv基因与载体连接后.导入大肠杆菌MC1 061.经四环素抗性筛选,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗独特型抗体库,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为80%.结论 用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,制备全人源抗肿瘤单链抗体(ScFv),这一策略是完全可行的.

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作者: 肖艳 [1] 李官成 [1] 李跃辉 [1] 童永清 [1] 张志杰 [1]
期刊: 《中国现代医学杂志》2008年18卷8期 1040-1044页 ISTICPKU
分类号: R735.7
栏目名称: 论著
DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2008.08.012
发布时间: 2008-07-28
基金项目:
湖南省卫生厅科研项目
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