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Tet-on Advanced调控人血管生素-1基因真核表达载体的构建、表达与鉴定

Construction and identification of human Angiopoietin-1 eukaryotic expression vector regulated by Tet-on Advanced system

摘要:

目的 构建pTRE-Tight-Ang-1可调控性真核表达载体,并检测其在心脏细胞中表达的可调控性.方法 巢式多聚酶链反应(nested PCR)从肺组织扩增Ang-1,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight载体中,采用脂质体将pTet-on-Advanced质粒和pTRE-Tight-Ang-1共转染入新生sD大鼠心肌细胞,以不同浓度强力霉素(Dox)诱导,Westem blot检测Ang-1蛋白表达水平.结果 通过巢式PCR获得了Ang-1全长cDNA,与Genebank比对,序列完全一致.Western blot检测表明,所构建的pTRE-Tight-Ang-1可调控性表达载体能在心肌细胞内表达,表达量呈浓度依赖性.结论 该实验成功构建pTKE-Tight-Ang-1真核表达载体,在心肌细胞中的表达受DOX的调控.

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作者: 张昊 [1] 董红燕 [2] 张中明 [1]
期刊: 《中国现代医学杂志》2008年18卷13期 1841-1844,1848页 ISTICPKU
分类号: R-332
栏目名称: 论著
DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2008.13.013
发布时间: 2008-09-01
基金项目:
国家自然科学基金
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