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改良三维条件下人胚胎干细胞向内皮细胞的分化及功能

Differentiation of Human Embryonic Stem Cells to Endothelial Cells via Improved Three-dimension Approach

摘要:

目的 建立一种改良的三维分化无血清方法,对人胚胎干细胞(hESCs)向内皮细胞进行分化,并对这种方法得到的人胚胎干细胞来源内皮细胞(hESC-ECs)进行功能检测.方法 在低附着培养皿中培养未分化的H9hESCs12 d,使其形成类胚体(EBs),12d后将已形成的EBs收集起来,用浓度为1.5 mg/ml的I型鼠尾胶原重悬,加入六孔板中,在37℃待胶原凝固后加入EGM-2培养基培养3d,获得出芽类胚体后用0.25%胶原酶I和0.56 U/ml Liberase Blendzyme消化芽生类胚体各20 min,采用流式技术分选出其中CD31阳性的细胞,并用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)摄取实验和成管实验验证这部分细胞的内皮细胞功能.结果 建立了一种基于胶原培养环境的三维分化方法,采用这种方法能够将hESCs向内皮细胞分化的效率提高到18%,最终获得的hESC-ECs具有和人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)相似的细胞表面标志物,并在乙酰化LDL吞噬实验和血管新生实验中表现出良好的内皮细胞功能.结论 建立的改良三维分化方法能够明显提高hESCs向内皮细胞的分化效率,是一种简单高效的分化方法,同时无血清培养方法为将来hESC-ECs的临床应用提供了可能.

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作者: 苏位君 [1] 王宝玉 [2] 宋祥和 [3] 王丽娜 [4] 刘艳华 [4] 周曼倩 [4] 童玲玲 [5] 李宗金 [5]
期刊: 《中国医学科学院学报》2012年34卷6期 539-544页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: R322.1
栏目名称: 论著
DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2012.06.001
发布时间: 2013-02-28
基金项目:
国家自然科学基金 天津应用基础与前沿技术研究计划重点项目
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