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混合5'-核苷酸的分离与检测

摘要:

以核酸酶P1酶解RNA产物为材料.对离子交换树脂分离混合5'-核苷酸的工艺条件进行研究,并通过建立的RP-HPLC检测方法鉴定单核苷酸分离效果.结果 表明,阳离子交换树脂NH-1可使4种单核苷酸有效分离,洗脱顺序依次为UMP→GMP→CMP→AMP;最佳分离条件为:色谱柱径高比=1:20,RNA酶解液上样浓度20g/L,吸附时间8h,洗脱流速0.5mL/min.确定RP-HPLC C18反相柱的色谱条件为:流动相KH2PO4-甲醇,在30mmol/L KH2PO4(pH 5.5)以及0.5mL/min流速条件下,按照KH2PO4:甲醇=100:0→97:3,15min,97:3→95:5,1min进行梯度洗脱.通过外标法对混合单核苷酸的分离效果进行检测,证明增加吸附时间是改善分离效果的重要因素.

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