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内毒素脂多糖诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α

Lipopolysaccharide induces expression of macrophage inflammatory protein-1α in human umbilical vein endothelial cells

摘要目的了解内毒素脂多糖是否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α).方法使培养的HUVEC暴露于不同浓度的脂多糖,用地高辛标记的MIP-1α cDNA探针与HUVEC的总RNA进行斑点杂交,并与HUVEC进行原位杂交,同时用HUVEC的总RNA与MIP-1α引物的混合物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),以检测HUVEC的MIP-1α mRNA的表达;再者,将培养的HUVEC用MIP-1α单克隆抗体进行细胞酶联免疫吸附试验(ELISA),以检测其MIP-1α蛋白表达.结果斑点杂交显示,暴露于浓度为1 μg/ml 和10 μg/ml脂多糖时HUVEC mRNA在硝酸纤维素膜上斑点的积分吸光度(A)值分别为1.490和3.310,分别为对照组(0.775)的1.97倍和4.38倍.原位杂交显示,当HUVEC暴露于浓度为1 μg/ml脂多糖后,其MIP-1α mRNA表达与对照组相比有明显增加,方差分析表明,差异有非常显著性(F=142.83,P<0.01).但当其暴露于10 μg/ml脂多糖后, 其MIP-1α mRNA 表达则较低.RT-PCR显示,暴露于浓度为1、5和10 μg/ml脂多糖时HUVEC的MIP-1α mRNA表达分别为对照组的1.65倍、2.86倍和1.26倍.细胞ELISA显示,各组HUVEC暴露于脂多糖后,其MIP-1α蛋白表达均明显增加,尤以5 μg/ml脂多糖组最为显著.方差分析表明,差异有显著性(F=15.36,P<0.05).结论内毒素脂多糖可诱导培养的HUVEC表达高水平的MIP-1α mRNA和蛋白,从而在动脉内膜的单核/巨噬细胞的募集起重要作用.