换一批稳定过表达Smac基因对胃癌细胞株凋亡活性的调控作用
Regulatory effects on apoptotic activities of gastric cancer cell line by over-expression of Smac gene
摘要目的探讨稳定过表达Smac 基因对胃癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染MKN-45细胞,G418筛选阳性克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 印迹鉴定Smac表达,同时以丝裂霉素作为凋亡诱导因子,采用锥虫蓝活细胞拒染法检测癌细胞体外生长活性,透射电镜、吖啶橙-溴化乙啶荧光染色法、末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察癌细胞凋亡及比率;Western印迹、比色法检测细胞内caspase-3表达.结果所获胃癌亚克隆细胞MKN-45/Smac的Smac mRNA、蛋白表达水平均显著高于MKN-45(P<0.01).10 μg/ml 丝裂霉素作用6～24 h后,与MKN-45细胞比较,MKN-45/Smac细胞生长活性减弱10.0%～30.8%(P<0.01),部分MKN-45/Smac细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率增高21.2%(P<0.01).丝裂霉素作用后,MKN-45/Smac细胞内caspase-3的表达和活性均较MKN-45细胞显著增强(P<0.01).结论胃癌细胞中Smac基因的过表达,能提高丝裂霉素作用后细胞中caspase-3的表达和活性,显著诱导癌细胞凋亡,为调控胃癌细胞凋亡活性提供了新的途径.
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DOI
10.3760/j.issn:0529-5807.2005.02.008
发布时间
2005-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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