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STK 15基因沉默导致胃癌细胞分裂停滞

Mitotic arrest of gastric cancer cells induced by silencing of STK15 gene

摘要目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶15 (serine/threonine kinase15, STK15) 基因在胃癌细胞有丝分裂中的作用.方法应用RNA干扰技术(RNAi)抑制胃癌细胞株MKN45细胞STK15基因表达;real-time定量PCR及Western blot检测干扰前后STK15 mRNA及蛋白质表达的变化;倒置显微镜观察MKN45细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化;MTT法检测细胞增殖速度的变化;免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管及有丝分裂表型的改变.结果 STK15基因沉默后,其 mRNA及蛋白质表达明显下降,real-time PCR结果显示,转染后48 h, STK15-组STK15 mRNA 水平较对照siRNA组的下降了89.54%;Western blot灰度比半定量检测显示,STK15蛋白水平较对照siRNA组降低了57.18%.较多MKN45细胞呈圆形改变并呈现G2期细胞的DNA含量, STK15-组3个时间点的圆形细胞占18.95%,而对照siRNA组为8.34%,差异有统计学意义 (P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,STK15-组G2期DNA含量细胞平均值为26.13%,而对照siRNA组G2期DNA含量细胞平均值12.46%(P<0.05).细胞增殖速度减慢(P<0.05).细胞有丝分裂表型发生改变(P<0.05).结论 STK15基因在MKN45细胞有丝分裂过程中可能起着关键作用,阻断其表达可导致MKN45细胞有丝分裂停滞.