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抗Toll样受体4胞外C端结构域单克隆抗体制备及其治疗脓毒症的初步效果

Preparation of anti-TLR4 extracellular C-terminal domain monoclonal antibody and its application to sepsis

摘要:

目的 制备针对Toll样受体4(TLR4)胞外C端结构域的单克隆抗体,并探讨抗TLR4 C端单克隆抗体对脓毒症的影响. 方法 原核表达、丙烯葡聚糖凝胶(Sephacryl S-100)纯化获得大鼠来源的TLR4 C端多肽(氨基酸序列:368-579,命名为TLR4-C),免疫6~8周雌性Balb/c小鼠,经细胞融合、抗体筛选、纯化等程序制备抗TLR4-C单克隆抗体,采用Western印迹、细胞免疫荧光对制备的TLR4-C单克隆抗体进行特异性检测.通过细胞实验和脓毒症动物模型实验进行抗体活性测定.(1)细胞实验:100 μg/ml抗体加入培养的NR8383作用1h,加入10 ng/ml 脂多糖(LPS)继续培养12 h后,ELISA检测培养基中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放水平;(2)脓毒症动物模型实验:40只SD大鼠按随机数字表法分为对照抗体组、B-D5抗体组,每组尾静脉分别注射50 mg/kg相应抗体,1h后经腹腔给予10 mg/kg致脓毒症剂量的LPS,4h后检测两组血清TNF-α含量,并连续72 h观察两组动物存活情况. 结果 获得3株特异性高、且能结合TLR4-C和TLR4全蛋白的抗TLR4-C单克隆抗体.细胞活性测定显示,1株单克隆抗体(B-D5)能明显抑制细胞TNF-α的释放,其余2株对抑制细胞TNF-α的作用较弱.动物模型实验显示,B-D5抗体组TNF-α水平为(1.54±0.18) ng/ml,明显低于对照抗体组的(0.51 ±0.10) ng/ml (P<0.01),B-D5抗体组存活率(70%)明显高于对照抗体组(30%)(P<0.05). 结论 制备的抗TLR4 C端单克隆抗体具有很好的TLR4中和作用,明显提高大鼠的存活率,对LPS诱发的脓毒症具有较好的保护作用.

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作者: 陈锋 [1] 刘英富 [2] 李光宗 [3] 张益 [3] 郁硕 [3] 侯世科 [1]
作者单位: 300070,天津医科大学研究生院 [1] 武警后勤学院附属医院灾害应急救援医学全军重点实验室 [2] 武警后勤学院附属医院救援医学研究所 [3]
期刊: 《中华创伤杂志》2016年32卷7期 655-660页 ISTICPKUCSCDCA
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-8050.2016.07.016
发布时间: 2016-08-16
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