转染BIG-3基因的人骨髓基质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究
Differentiation of human bone marrow stromal cells (hBMSCs) transfected with BIG-3 gene into chondrocytes
目的 研究转染BIG-3基因对人骨髓基质干细胞(hBMSCs)向软骨细胞诱导分化的影响.方法 将构建好的pMSCVpuro-BIG-3转染至建系的hBMSCs,5 μg/mL嘌罗霉素筛选12 d后,扩增并收集细胞,电泳证实特定条带无误.实验分三组:hBMSCs-BIG-3组、hBMSCs-EV组和hBMSCs组,每组重复6次,将三组细胞制成微粒模拟三维培养模式,分别加入浓度为400 ng/mL的重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)作用14d后,检测甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原mRNA,利用MPS60病理图象分析系统采集图像,并进行灰度分析,半定量比较基质表达量.结果 灰度值:hBMSCs-BIG-3组为684 481 822,hBMSCs-EV组为439 101 780,hBMSCs组为441 082 183,hBMSCs-BIG-3组灰度值明显高于后两组(P<0.05),hBMSCs-EV组和hBMSCs组之间差异无显著性意义(P=0.862).结论 BIG-3基因有助于hBMSCs向软骨细胞诱导分化.
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