丙型肝炎病毒非结构蛋白5A及其结构域Ⅱ对小鼠肝细胞糖异生的影响

Effect of hepatitis C virus nonstructural protein 5A and its domains Ⅱ on hepatocyte gluconeogenesis in mice

摘要:

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A (NS5A)及其片段NS5A结构域Ⅰ、结构域Ⅱ、结构域Ⅲ调节小鼠糖异生的机制.方法 60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为6组,分别将小鼠肝细胞特异性表达重组全长NS5A蛋白及其片段NS5A结构域Ⅰ、结构域Ⅱ、结构域Ⅲ的慢病毒颗粒经C57BL/6J雄性小鼠尾静脉注射制备动物模型,以未注射组和注射增强绿色荧光蛋白慢病毒颗粒组为阴性对照.检测全长NS5A蛋白及其片段对小鼠空腹血糖及空腹胰岛素水平的影响;取小鼠肝组织制备石蜡切片,免疫组织化学方法检查小鼠肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的表达水平;实时荧光定量PCR (qRCR)和(或)Western blot方法检测小鼠肝组织NSSA、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)和PEPCK的表达水平.结果 与未注射组(0.65±0.28)和(或)注射EGFP慢病毒颗粒组(0.87±0.36)相比,注射重组全长NS5A (1.79±0.64)和NS5A结构域(2.24±0.69)Ⅱ慢病毒颗粒的小鼠空腹血糖和胰岛素抵抗指数明显升高(P< 0.01);免疫组织化学和qRCR检测显示糖异生的关键酶PEPCK的表达量明显增多;Western blot检测结果显示NS5A蛋白和NS5A结构域Ⅱ抑制了磷酸化AMPK (Thr172)的水平、提升了SREBP-1和PEPCK的水平.结论 NS5A蛋白和NS5A结构域Ⅱ可能通过调节AMPK/SREBP-1/PEPCK而影响小鼠肝细胞糖代谢,NS5A结构域Ⅱ可能在HCV感染引起肝细胞胰岛素抵抗中起重要作用.

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