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miR-155对乙型肝炎病毒复制及PTEN表达的影响

The effect of miR-155 on HBV replication and PTEN expression in vivo

摘要:

目的 构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155,探讨其在乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠中对HBV复制及PTEN基因表达的调控作用. 方法 PCR扩增mmu-miR-155的前体基因片段(pre-mmu-miR-155),双酶切后连接到pmR-mCherry载体上,通过菌落PCR、双酶切和测序验证重组载体的准确性.将重组载体采用高压尾静脉法注入HBV转基因小鼠体内作为实验组,同时设空质粒组(注入pmR-mCherry空质粒)、空白组(注入等体积磷酸盐缓冲液),7d后qPCR检测各组细胞miR-155的表达情况,14d采用酶联免疫吸附法检测干扰素(IFN)γ表达量;1个月后qPCR检测肝内细胞因子信号抑制物(SOCS)1、PTEN基因mRNA表达量及Western blot检测肝内SOCS1、PTEN、HBX蛋白表达水平.两组数据比较采用独立样本t检验;三组数据比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD法. 结果 经菌落PCR、双酶切和测序证实,pre-mmu-miR-155基因片段成功插入pmR-mCherry载体中.注入质粒7d后,实验组表达miR-155的水平明显升高(t=8.90,P<0.01);注入质粒14 d后,实验组IFN γ表达量较空白组升高(F=26.58,P<0.01);注入质粒30 d后,实验组肝内SOCS1、PTEN mRNA (FSOCSI mRNA=19.72,P< 0.01;FPTEN mRNA=7.38,P<0.05)及蛋白表达水平(FSOCS1=50.30,P<0.01;FPTEN=129.00,P<0.01)均下降,同时HBX表达水平下降(FHBX=77.97,P< 0.01). 结论 成功构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155,该重组载体可稳定表达mmu-miR-155;miR-155可以通过下调SOCS1表达,进而促进IFN γ的表达,增强HBV转基因小鼠的抗HBV能力.与此同时,miR-155可下调PTEN的表达,有潜在的促进肝癌发生的可能.

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