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rTpN17和rTpN47及其融合蛋白酶联免疫吸附试验检测梅毒血清标本的效果

Study on ELISAs with rTpN17, rTpN47 and its fusion protein as antigens in the detection of serum samples from syphilis patients

摘要:

目的 构建梅毒螺旋体tpn17、tpn47基因及tpn17-tpn47融合基因原核表达系统,建立基于rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47的ELISAs并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价.方法 采用常规分子生物学方法扩增并克隆梅毒螺旋体tpn17和tpn47基因,以连接引物PCR构建tpn17-tpn47人工融合基因,建立上述目的 基因原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的 重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的 重组蛋白,Western blot检测其免疫性.分别以rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47为包被抗原,建立相应ELISAs检测健康人群、类风湿关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)患者及梅毒患者血清标本中梅毒抗体并与现行TRUST和TPHA进行比较.结果 克隆的tpn17、tpn47基因及构建的tpn17-tpn47融合基因与GenBank中相关序列相似性为100%.rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47表达量分别为细菌总蛋白的37.2%、23.3%和29.8%,其提纯物电泳后均显示单一条带,并均能与梅毒抗体阳性血清发生明显的结合反应.rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA和rTpN17-TpN47-ELISA对所有健康人血清、RA和SLE患者血清标本的检测结果均为阴性,对梅毒患者血清标本检测阳性率分别为84.4%、82.3%和98.1%,其中rTpN17-ELISA和rTpN47-ELISA检测阳性率低于TPHA(P<0.01),rTpN17-TpN47-ELISA检测阳性率相似(P>0.05),但均高于TRUST(71.4%).结论 研究中建立的rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA,尤其是rTpN17-TpN47-ELISA,有望成为快速、简便、安全的梅毒患者血清学筛查方法.

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