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表皮生长因子对肿瘤坏死因子α致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

Inhibitory effect of epidermal growth factor on apoptosis in HaCaT keratinocytes induced by TNF-α

摘要:

目的 了解肿瘤坏死因子α(TNF-α)导致HaCaT细胞凋亡过程中过氧化物酶体增殖物激活受体β(PPARβ)的表达情况,探讨表皮生长因子(EGF)对HaCaT细胞的保护机制.方法 将培养的HaCaT细胞分为正常对照组(不作任何处理)、TNF-α小剂量组(10 ng/ml TNF-α处理)、TNF-α大剂量组(20 ng/ml TNF-α处理)、EGF+TNF-α小剂量组、EGF+TNF-α大剂量组,后2组先用20 ng/ml EGF培养4 h后,再分别予以10、20 ng/ml TNF-α处理.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)荧光检测试剂盒测定caspase-3的活性,噻唑蓝比色法检测细胞存活率.以5、10、20、40 ng/ml的EGF处理HaCaT细胞,采用反转录-PCR和蛋白质印迹法检测PPARβ mRNA及其蛋白的表达.结果 与TNF-α小剂量组[(32±6)%]、TNF-α大剂量组[(57±6)%]比较,EGF+TNF-α小剂量组、EGF+TNF-α大剂量组细胞凋亡率[(20±3)%、(28±4)%]明显下降(P<0.01),caspase-3活性降低、存活率上升(P<0.01).20ng/ml EGF处理细胞时,PPARβ mRNA及其蛋白表达最强.结论 EGF在抑制TNF-α导致的HaCaT细胞凋亡的同时,亦增强细胞中PPARβ的表达.

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