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应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

Screening of interferon-β binding proteins by yeast-two hybrid technique from a cDNA library

摘要:

目的 应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白.方法 用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析.结果 应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白.初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用.结论 应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白.

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作者: 钟彦伟 [1] 成军 [2] 郭风劲 [3] 曲建慧 [1] 纪冬 [1] 程勇前 [1] 李晓东 [1] 郭江 [2] 戴久增 [1] 王琳 [1] 徐东平 [1]
期刊: 《中华实验和临床病毒学杂志》2006年20卷4期 343-345页 MEDLINEISTICCSCD
分类号: Q5
栏目名称: 论著
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2006.04.014
发布时间: 2007-01-22
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