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抗人膀胱癌单链抗体的构建及表达的研究

Construction and expression of single chain Fv antibody against human bladder carcinoma

摘要:

目的为膀胱癌的导向诊断和治疗提供免疫原性更低的单链抗体. 方法从1株分泌鼠抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株BDI-1中分离出总RNA,逆转录cDNA,并以此为模板用聚合酶链反应技术扩增VH和VL基因,分别克隆入pUC19质粒,进行序列分析.将VH和VL插入表达载体pFUW80中,并转化大肠埃希菌JM83,诱导表达出抗人膀胱癌单链抗体.用免疫竞争抑制酶联免疫吸附测定法鉴定免疫活性.用固相化的金属离子亲和层析柱纯化抗人膀胱癌单链抗体. 结果VH全长366 bp,属于小鼠重链可变区Ⅱ亚类;VL全长324 bp,属于小鼠K轻链IV亚类.表达产物可抑制原单抗BDI-1与人膀胱癌细胞结合的活性.纯化的单链抗体是分子量约29*!000的单一蛋白条带. 结论抗人膀胱癌单链抗体被成功地构建并表达.

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