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前甲状旁腺激素原基因定点突变后转染体细胞产生甲状旁腺激素的实验研究

A study on polymerase chain reaction site-directed mutagenesis of prepro-parathyroid hormone in vitro

摘要:

目的研究对前甲状腺激素原基因进行定点突变,并转染体细胞产生成熟甲状旁腺激素.方法采用聚合酶链反应(PCR)定点突变技术,自组织基因组基因中扩增前甲状旁腺激素原的cDNA,并将野生型甲状旁腺激素编码第28位的密码子GTT突变为AGA,使N端28-31氨基酸变为Arg-Lys-Lys-Arg,成为furin酶的酶切位点;将获得的突变表达载体pcDNA3.1/mPTH通过脂质体法转染体外培养的293细胞,用放射免疫法测定表达水平.结果成功地获得突变型甲状旁腺激素原cDNA,293细胞转染突变表达载体后,每日培养液中甲状旁腺激素含量达28.34~52.64 pg/2.0×106细胞,远高于空载体转染的细胞培养液.结论利用PCR技术可获得突变型甲状旁腺激素原的cDNA,突变表达载体pcDNA3.1/mPTH能成功转染体细胞并产生甲状旁腺激素.

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作者: 朱易凡 [1] 王深明 [1]
第一作者: 朱易凡
期刊: 《中华外科杂志》2005年43卷5期 304-306页 MEDLINEISTICPKUCSCD
栏目名称: 乳腺、甲状(旁)腺外科
DOI: 10.3760/j:issn:0529-5815.2005.05.011
发布时间: 2005-05-12
基金项目:
国家自然科学基金
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